酶標(biāo)檢測(cè)儀檢測(cè)飼料中三聚氰胺殘留的方法
作者：admin 時(shí)間：2021-05-19 02:00:42 點(diǎn)擊次數(shù):6998
酶聯(lián)吸附法測(cè)定三聚氰胺殘留量的方法。用提取液將樣品中三聚氰胺均質(zhì)振蕩提取**。首先將三聚氰胺酶標(biāo)記物、樣品提取液和標(biāo)準(zhǔn)品加入涂有三聚氰胺抗體的微孔開(kāi)始反應(yīng)。在30分鐘的孵育過(guò)程中，樣品提取液中的三聚氰胺與三聚氰胺酶標(biāo)記物競(jìng)爭(zhēng)，與微孔中的三聚氰胺抗體結(jié)合。孵育30分鐘后，微孔中所有未結(jié)合的三聚氰胺和三聚氰胺酶標(biāo)記物都被沖洗掉。用去離子水洗滌后，在每孔中加入一種清晰的底物溶液，結(jié)合酶標(biāo)記將無(wú)色底物轉(zhuǎn)化為藍(lán)色物質(zhì)。孵育30分鐘后停止反應(yīng)，根據(jù)各孔顏色讀取數(shù)據(jù)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)顏色，得到樣品中三聚氰胺的濃度值。
一、酶標(biāo)檢測(cè)儀檢測(cè)飼料中三聚氰胺所需的材料:
1. 蒸餾水或去離子水
2. 可以吸收50ul和100ul的移液器和吸頭
3.4000轉(zhuǎn)離心
4. 吸水性紙或同等的吸水性材料
5. 450海里標(biāo)
6. 計(jì)時(shí)器
7. 20mM PBS:自備
8. 清洗液:需自備
二、酶標(biāo)檢測(cè)儀檢測(cè)飼料中的三聚氰胺試劑配制：
1、20mM PBS： 0.62g NaH2PO4·2H2O+5.73g Na2HPO4·12H2O+9g NaCl，蒸餾水定容至1000ml
2、清 洗 液： 0.62g NaH2PO4·2H2O+5.73g Na2HPO4·12H2O+9g NaCl，蒸餾水定容至1000ml.+0.5ml 土溫20
三、酶標(biāo)檢測(cè)儀檢測(cè)飼料中的三聚氰胺樣品的前處理： 飼料（稀釋倍數(shù)：20）
1、稱1g飼料樣品，加入4ml甲醇；
2、震蕩1min，加入0.1g氯化鈉；
3、4000轉(zhuǎn)離心5min；
4、取上清液0.2ml加入到0.8ml的20mMPBS中，混勻；
5、取150ul測(cè)定。
四、酶標(biāo)檢測(cè)儀檢測(cè)飼料中三聚氰胺的過(guò)程:
1. 將所有試劑和樣品放回室溫20-28℃，但時(shí)間不要超過(guò)24小時(shí);
2. 從鋁箔袋中取出所需數(shù)量的微孔條，固定在微孔板架上，將未使用的微孔條與干燥劑一起放入密封袋中存放;
3.用吸管將150ul標(biāo)準(zhǔn)品和樣品吸入相應(yīng)的微孔。確保每一種溶液都是用干凈的吸管來(lái)繪制的，以避免交叉污染。加入
每孔加入50ul三聚氰胺酶標(biāo)記物;
4. 輕輕搖動(dòng)盤(pán)子60秒，20-28攝氏度孵育30分鐘;
5. 將微孔中的溶液倒入水槽中，將清洗液填滿微孔，搖勻丟棄，重復(fù)三次，共四次清洗盤(pán)子;
6. 清洗一次后，將溶液倒進(jìn)孔中，然后翻轉(zhuǎn)微孔板，在吸水紙上輕拍干燥;
7. 每個(gè)微孔加入100ul底物溶液;
8. 20-28℃孵育30分鐘;
9. 每個(gè)微孔加入100ul停止液;
10. 用萊恩德酶標(biāo)檢測(cè)儀在450nm下讀板
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